Come vengono quantificati i peptidi del catalogo?
Ehilà! Sono un fornitore di peptidi da catalogo e oggi voglio parlare di come procediamo a quantificare questi piccoletti. I peptidi sono estremamente importanti in tutta una serie di campi, dalla ricerca alla medicina, e ottenere una quantificazione accurata è fondamentale.
Prima di tutto, parliamo del motivo per cui abbiamo bisogno di quantificare i peptidi del catalogo. Bene, quando i ricercatori o le persone in campo medico usano i peptidi, devono sapere esattamente con quanto stanno lavorando. Che si tratti di un esperimento di laboratorio, di una sperimentazione clinica o dello sviluppo di un nuovo farmaco, le quantità precise sono importanti. Se ne usi troppo poco, i risultati potrebbero non essere accurati, mentre se ne usi troppo potresti rovinare tutto.
Quindi, come lo facciamo? Esistono alcuni metodi diversi e li analizzerò per te.
Uno dei metodi più comuni è la spettroscopia UV-Vis. Questo metodo sfrutta il fatto che i peptidi assorbono la luce ultravioletta e visibile a lunghezze d'onda specifiche. Gli aminoacidi come il triptofano, la tirosina e la fenilalanina hanno determinate proprietà di assorbimento. Quando emettiamo luce a una particolare lunghezza d'onda attraverso una soluzione del nostro peptide, possiamo misurare la quantità di luce assorbita. In base al valore di assorbimento e al coefficiente di estinzione noto del peptide (che è legato alla sua composizione aminoacidica), possiamo calcolare la concentrazione del peptide nella soluzione. Ad esempio, se abbiamo un peptide con un alto contenuto di triptofano, assorbirà più luce intorno a 280 nm. Usiamo una formula semplice, basata sulla legge Beer-Lambert, per calcolare la concentrazione. È un metodo relativamente semplice e veloce, ma presenta alcune limitazioni. I contaminanti nella soluzione peptidica possono anche assorbire la luce alle stesse lunghezze d'onda, il che può falsare le nostre misurazioni.
Un altro metodo popolare è il test Bradford. Questo è un test colorimetrico che si basa su un colorante chiamato Coomassie Brilliant Blue G - 250. Quando questo colorante si lega al peptide, cambia colore. Possiamo quindi misurare l'assorbanza della soluzione colorata ad una specifica lunghezza d'onda (solitamente intorno a 595 nm). La quantità di cambiamento di colore è proporzionale alla quantità di peptide nella soluzione. Creiamo una curva standard utilizzando concentrazioni note di un peptide di riferimento, quindi confrontiamo l'assorbanza del nostro campione di peptide sconosciuto con quella curva per determinarne la concentrazione. Il test Bradford è piuttosto sensibile, ma può essere influenzato da alcune sostanze presenti nel campione, come detergenti o sali.
Anche l'HPLC, o cromatografia liquida ad alte prestazioni, è ampiamente utilizzata per la quantificazione dei peptidi. Nell'HPLC separiamo il peptide dagli altri componenti del campione in base alle sue proprietà chimiche, come la sua idrofobicità. Iniettiamo la soluzione peptidica in una colonna riempita con una fase stazionaria, quindi utilizziamo una fase mobile (un solvente liquido) per spingere il peptide attraverso la colonna. Peptidi diversi si muoveranno attraverso la colonna a velocità diverse e possiamo rilevarli mentre escono dalla colonna utilizzando un rilevatore, solitamente un rilevatore UV. Confrontando l'area del picco del nostro peptide di interesse con le aree del picco degli standard noti, possiamo calcolarne la concentrazione. L'HPLC è ottimo perché può separare e quantificare i peptidi anche in miscele complesse, ma richiede un po' più di tempo e attrezzature specializzate.
Ora parliamo un po' di alcuni dei peptidi del catalogo che offriamo. PrendereEntero-IlambatinaPer esempio. Quando quantifichiamo questo peptide, utilizziamo una combinazione di questi metodi per ottenere il risultato più accurato. Per prima cosa utilizziamo la spettroscopia UV-Vis per ottenere una stima approssimativa della concentrazione, quindi la ricontrolliamo con HPLC. In questo modo possiamo tenere conto di eventuali potenziali contaminanti o interferenze nel campione.
Un altro lo èE[c(RGDyK)]2. Questo peptide ha alcune proprietà uniche e dobbiamo prestare particolare attenzione nel quantificarlo. Il test Bradford potrebbe non essere la scelta migliore in questo caso a causa della sua specifica composizione di aminoacidi, quindi ci affidiamo maggiormente alla spettroscopia HPLC e UV-Vis.
E poi c'èMazdutide (Lys20(N₃-CH₂CO-)). Questo è un peptide più complesso e utilizziamo un approccio in più fasi. Iniziamo con UV - Vis per ottenere una lettura iniziale, quindi utilizziamo HPLC per separarlo da eventuali impurità e ottenere una quantificazione più accurata.
Nella nostra azienda, il controllo qualità è un grosso problema. Ci assicuriamo di seguire protocolli rigorosi durante la quantificazione dei peptidi del nostro catalogo. Eseguiamo più test su ciascun lotto e confrontiamo i nostri risultati con materiali di riferimento certificati per garantirne l'accuratezza. Conserviamo inoltre registrazioni dettagliate di tutti i dati di quantificazione, in modo che i nostri clienti possano avere piena fiducia nei peptidi che stanno acquistando.
Se cerchi peptidi da catalogo di alta qualità e hai bisogno di una quantificazione accurata, siamo qui per aiutarti. Che tu sia un ricercatore alla ricerca di peptidi per il tuo prossimo grande esperimento o un'azienda farmaceutica che sviluppa un nuovo farmaco, abbiamo i peptidi di cui hai bisogno. Il nostro team di esperti è sempre disponibile per rispondere a qualsiasi domanda tu possa avere sui nostri prodotti o sul processo di quantificazione. Quindi, non esitare a contattarci e ad iniziare una conversazione sulle tue esigenze di peptidi. Siamo pronti a collaborare con voi per trovare le migliori soluzioni per i vostri progetti.
Riferimenti
- Scopes, RK (1994). Purificazione delle proteine: principi e pratica. Springer.
- Skoog, DA, West, DM, Holler, FJ e Crouch, SR (2013). Fondamenti di Chimica Analitica. Apprendimento Cengage.
- Bollag, DM, Rozycki, MD, & Edelstein, SJ (1996). Metodi proteici. wiley - liss.