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Sala 309, edificio Meihua, parco industriale di Taiwan, No.2132 Songbai Road, distretto di Bao'an, Shenzhen, Cina
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Domande frequenti
Quali metodologie di sintesi utilizza Biorunstar per la sintesi dei peptidi?
RE: Biorunstar ha sviluppato diverse metodologie di sintesi in fase di soluzione per soddisfare le esigenze dei clienti. Di solito viene applicata la chimica Fmoc in fase solida.
Come spedite i peptidi? Quali dati QC verranno forniti?
RE: Tutti i peptidi verranno spediti tramite DHL o FedEx Express come polvere liofilizzata in fiale individuali ben etichettate, a temperatura ambiente. Ad eccezione dei peptidi grezzi, che saranno controllati solo mediante spettrometria MALDI-MASS, tutti i peptidi sintetici purificati vengono forniti con un rapporto di progetto (CoA), dati MS e dati HPLC. verranno fornite schede tecniche contenenti le caratteristiche chiave, come sequenza peptidica, purezza, quantità, modificazione, dati sullo spettro di massa e dati HPLC.
Qual è il tempo di risposta tipico per la sintesi del peptide? Quanto tempo ci vuole per spedirmi?
RE: Il nostro tempo di consegna tipico è di 2-3 settimane per un peptide standard con meno di 30 aminoacidi. Il tempo di risposta varia a seconda della lunghezza, della quantità, della solubilità e della difficoltà del peptide. In genere 3-5 giorni per raggiungere i ricercatori in altri paesi.
Per quanto tempo puoi sintetizzare?
RE: Biorunstar ha una vasta esperienza nella sintesi di peptidi lunghi, fino a 130aa. A differenza di molti fornitori di peptidi che si sentono a proprio agio solo nel produrre peptidi inferiori a 30 o 40aa, Biorunstar ha una buona esperienza nella produzione di peptidi che vanno da 40aa a 90aa. È difficile sintetizzare peptidi lunghi, soprattutto 100aa o più. Se intendi sintetizzare una sequenza di 130aa o più, contattaci per un servizio personalizzato di espressione e purificazione delle proteine.
Cosa succede se si verificano problemi durante il processo di sintesi o purificazione?
RE: Ogni peptide ha le sue caratteristiche specifiche. Se durante la sintesi si verificano problemi oltre le nostre aspettative e non possiamo consegnare il tuo peptide in tempo, ti informeremo il prima possibile. Nel caso in cui non siamo in grado di produrre il peptide, non ti verrà addebitato alcun costo.
Forma di sale TFA, forma di sale acetato o HCl: quale forma dovrei scegliere?
Per impostazione predefinita, i peptidi vengono sintetizzati nel sale TFA. Per gli esperimenti relativi a colture cellulari o tissutali, è necessario considerare la produzione di peptidi sotto forma di acetato o sale di HCl al 98% o superiore per evitare risposte anomale. La forma di acetato o sale HCl può essere richiesta a un costo aggiuntivo.
Qual è la durata di conservazione di un peptide?
RE: I peptidi sono stabili per almeno un anno se conservati liofilizzati nel congelatore. Se i peptidi vengono sciolti, la durata di conservazione potrebbe essere ridotta. Se i peptidi contengono diversi amminoacidi reattivi che possono essere ossidati come Trp, Met ma soprattutto Cys, anche la durata di conservazione potrebbe essere ridotta.
Il peptide contiene diverse cisteine e può quindi formare facilmente legami disolfuro. Come posso evitarlo?
RE: Se la sequenza peptidica contiene diverse cisteine o altri amminoacidi reattivi che si ossidano facilmente, Biorunstar offre di fornire il peptide con tracce del forte riducente DTT. Il peptide viene fornito con DTT solo se ciò è espressamente consentito dal cliente.
Come conservo i miei peptidi sintetici?
RE: La maggior parte dei peptidi liofilizzati sarà stabile a temperatura ambiente per 2-3 settimane. Per la conservazione a lungo termine, è necessario conservare i peptidi liofilizzati a -20 gradi. Dovrebbero essere evitati cicli ripetuti di congelamento-scongelamento. Lasciare che raggiunga la temperatura ambiente prima dell'apertura. La durata di conservazione delle soluzioni peptidiche è limitata; una soluzione peptidica una volta preparata deve essere utilizzata il prima possibile.
Qual è la purezza del peptide grezzo e del peptide dissalato? Come si purifica il peptide? Quali sono le impurità?
RE: Per peptidi corti con sequenze normali inferiori a 15aa, generalmente è pari al 40-60% mediante HPLC per il grado grezzo; 50-70% mediante HPLC per grado dissalato. Più lungo è il peptide, minore è la purezza del prodotto grezzo o dissalato. I peptidi vengono generalmente purificati mediante HPLC utilizzando acqua e gradiente di acetonitrile. La maggior parte delle impurità sono frammenti o peptidi di delezione, peptidi non completamente protetti e sale e acqua residui.
Spiegazione della purezza del peptide mediante HPLC, contenuto peptidico totale e contenuto peptidico target.
RE: Biorunstar spedisce i peptidi in base al peso lordo della polvere liofilizzata. La polvere liofilizzata comprende impurità come frammenti o peptidi di delezione, peptidi non completamente deprotetti, TFA e acqua residua. La purezza del peptide viene misurata mediante HPLC. È la quantità di peptide corretto rispetto a tutti gli analiti che assorbono a ~214 nm (il legame peptidico assorbe), molto probabilmente delezioni, troncamenti o sequenze non completamente deprotette, ecc. La purezza del peptide mediante HPLC non tiene conto dell'acqua e dei sali che normalmente sono presenti nel campione. Il contenuto totale di peptidi è la percentuale di peptidi totali presenti rispetto a tutto ciò che è presente nella polvere peptidica liofilizzata. Il contenuto totale di peptidi è determinato mediante analisi del contenuto di azoto. Il contenuto peptidico target nella polvere peptidica liofilizzata può quindi essere concluso con la formula: Contenuto peptidico totale X Purezza peptidica mediante HPLC.
Qual è il metodo di marcatura con la fluoresceina?
RE: FITC (isotiocianato di fluoresceina) è il precursore attivato utilizzato per la marcatura della fluoresceina. Per l'efficiente etichettatura Nterminal, un amminoesanoile a sette atomi
lo spaziatore (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) viene inserito tra il fluoroforo (fluorosceina) e il N-terminale del peptide. Questo distanziatore aiuta a separare il fluoroforo dal suo punto di attacco, riducendo potenzialmente l'interazione del fluoroforo con la biomolecola a cui è coniugato e rendendolo più accessibile ai reagenti di rilevamento secondari.
lo spaziatore (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) viene inserito tra il fluoroforo (fluorosceina) e il N-terminale del peptide. Questo distanziatore aiuta a separare il fluoroforo dal suo punto di attacco, riducendo potenzialmente l'interazione del fluoroforo con la biomolecola a cui è coniugato e rendendolo più accessibile ai reagenti di rilevamento secondari.
È possibile l’etichettatura C-terminale della biotina (o FITC)?
RE: Sì. La marcatura C-terminale della biotina (o FITC) viene eseguita mediante l'aggiunta di un residuo di lisina all'estremità C-terminale di un peptide e la biotina (o FITC) è attaccata alla catena laterale della lisina tramite un legame ammidico. La carica positiva della lisina viene rimossa.
Qual è la lunghezza appropriata del peptide per la produzione di anticorpi?
RE: Generalmente, si consiglia un peptide residuo 10-25. Un peptide più lungo potrebbe avere più epitopi, ma potrebbe anche avere maggiori possibilità di formare strutture secondarie stabili che non siano forme native. Un peptide più corto (<10aa) is generally not good unless there are valid reasons for it, such as potential sequence homology with a related family member or other proteins.
Cos'è una MAPPA?
RE: MAPS o Multi-Antigenic Peptide è un peptide ramificato in cui le catene peptidiche lineari sono collegate al loro C-terminale tramite il nucleo di polilisina, aumentando così le dimensioni dell'intera molecola. Questo viene fatto per eliminare l'accoppiamento dei peptidi con KLH. Sembra che, tuttavia, la conformazione dei peptidi sulla MAP sia meno flessibile e che gli anticorpi ottenuti dalla MAP riconoscano tipicamente la proteina bersaglio meno spesso rispetto alla coniugazione KLH convenzionale. Inoltre, durante la produzione delle MAPS non viene prodotto alcun peptide libero, il che rende difficile la rimozione degli anticorpi diretti al nucleo della polilisina. La purificazione di MAPS mediante HPLC è difficile e MAPS viene fornita senza verifica della massa a causa della sua eterogeneità e delle grandi dimensioni molecolari.
Perché la mia soluzione peptidica coniugata con KLH appare torbida?
RE: L'emocianina KLH o Keyhole Limpet è una grande proteina aggregante (MW=4x105 – 1x107). A causa delle sue dimensioni e struttura, la sua solubilità in acqua è limitata, provocando un aspetto torbido. Ciò non compromette l'immunogenicità e la soluzione torbida può essere utilizzata per le immunizzazioni.
Potete spiegare i picchi di massa M+Na e M+K negli spettri MALDI?
RE: È molto comune vedere addotti Na (sodio) e K (potassio) nello spettro MALDI. Il sodio e il potassio provengono dall'acqua utilizzata nei solventi peptidici. Anche l'acqua distillata e deionizzata contiene tracce di ioni sodio e potassio, che non possono mai essere completamente rimossi. Questi vengono ionizzati durante il processo di spettrometria di massa MALDI e si legano ai gruppi carbossilici liberi del peptide. Poiché non esiste un sistema di purificazione dell'acqua in grado di rimuovere ogni singolo ione sodio o potassio dall'acqua, vedere a volte gli addotti di sodio e potassio è molto comune e inevitabile nello spettrometro di massa MALDI. Ciò non indica che il peptide non sia puro, né deve essere confuso con un peso molecolare errato.