Gli ingredienti farmaceutici attivi di peptidi (API) hanno attirato una significativa attenzione nell'industria farmaceutica a causa della loro elevata specificità, bassa tossicità e potenziale per il trattamento di una vasta gamma di malattie. In qualità di fornitore di API peptidico leader, ci impegniamo a fornire prodotti peptidici di alta qualità attraverso metodi di sintesi avanzati. In questo blog, approfondiremo i vari modi in cui le API peptidiche sono sintetizzate.
Sintesi del peptide solido - fase (SPPS)
La sintesi di peptidi di fase solida è uno dei metodi più utilizzati per sintetizzare le API peptidiche. Questo approccio fu aperto da Robert Bruce Merrifield nel 1963, che rivoluzionò la sintesi peptidica e gli guadagnò il premio Nobel in chimica nel 1984.
Il principio di base di SPPS prevede l'attacco del terminale C del primo aminoacido a un supporto solido insolubile, come una resina. Questa resina fornisce una piattaforma stabile per le successive reazioni chimiche. Il gruppo amminico dell'amminoacido attaccato è protetto con un gruppo di protezione adatto, in genere FMOC (9 - fluorenilmetilossicarbonil) o BOC (Tert - butilossicarbonil).
Una volta che il primo aminoacido viene attaccato alla resina, il gruppo protettivo sul suo gruppo amminico viene rimosso, esponendo il gruppo amminico reattivo. L'amminoacido successivo, anche con il suo gruppo amminico protetto, viene quindi accoppiato al gruppo amminico libero dell'amminoacido precedentemente attaccato usando un reagente di accoppiamento. I reagenti di accoppiamento comunemente usati includono DIC (N, N ' - Diisopropylcarbodiimide), Hbtu (O - benzotriazolo - N, N, N', N ' - Tetrametil - Uronio - N, N, N, N, N, N, N, N, N', N ', N', Tetramethyluronio hexafluorofosfato).
Dopo ogni fase di accoppiamento, vengono limitati gruppi amminici non reagiti per impedire la formazione di sequenze di eliminazione. Questo di solito viene fatto usando l'anidride acetica. Il ciclo di deprotezione, accoppiamento e tappatura viene ripetuto per ogni aminoacido nella sequenza peptidica desiderata.
Una volta che l'intera sequenza peptidica è stata assemblata sulla resina, il peptide viene scisso dalla resina usando un cocktail di scissione. Questo cocktail rimuove anche tutti i gruppi di protezione della catena che erano presenti sugli aminoacidi durante la sintesi. Il peptide scisso viene quindi purificato con metodi come la cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC).
Soluzione - Sintesi del peptide di fase
Soluzione - La sintesi del peptide di fase è un metodo più vecchio ma ha ancora i suoi vantaggi in determinate situazioni. In questo metodo, tutte le reazioni avvengono in soluzione e il peptide non è attaccato a un supporto solido.
La sintesi inizia con la protezione dei gruppi amino e carbossilici dei singoli aminoacidi. Simile a SPPS, i gruppi di protezione come FMOC o BOC vengono utilizzati per il gruppo amminico e i gruppi ester vengono utilizzati per proteggere il gruppo carbossilico.
Il primo passo è l'accoppiamento di due aminoacidi protetti per formare un dipeptide. Ciò si ottiene utilizzando un reagente di accoppiamento, simile a quelli utilizzati negli SPP. Dopo la formazione del dipeptide, i gruppi protettivi su un'estremità del dipeptide vengono rimossi e viene quindi accoppiato con un altro aminoacido o dipeptide protetto per formare un peptide più lungo.
Il processo viene ripetuto passo - per - passo fino a quando non si ottiene la sequenza peptidica desiderata. Una delle sfide della sintesi di fase della soluzione è la purificazione dei peptidi intermedi in ogni fase, poiché la miscela di reazione contiene vari prodotti per - prodotti e materiali di partenza non reagiti. La purificazione viene in genere effettuata mediante estrazione, cristallizzazione o cromatografia.
Legatura chimica
La legatura chimica è un metodo potente per sintetizzare peptidi di grandi dimensioni o proteine che sono difficili da assemblare usando SPP tradizionali o sintesi di fase. Uno dei metodi di legatura chimica più noti è Native Chimical Legation (NCL).
In NCL, un peptide con un tioester terminale C - reagisce con un altro peptide con un residuo di cisteina N -terminale. La reazione si verifica in condizioni acquose lievi e provoca la formazione di un legame peptidico nativo tra i due peptidi.
Il processo prevede la prima sintetizzazione di due o più segmenti peptidici usando SPPS o sintesi di fase di soluzione. Un segmento viene preparato con un tioester terminale C e l'altro con una cisteina N -terminale. Questi segmenti vengono quindi miscelati in un tampone adatto e la reazione di legatura avviene. Dopo la legatura, se necessario, il residuo di cisteina può essere ulteriormente modificato o utilizzato come maniglia per ulteriori reazioni chimiche.
Sintesi convergente
La sintesi convergente è una strategia che combina i vantaggi sia dell'SPP che della legatura chimica. Invece di sintetizzare l'intera sequenza peptidica in modo lineare, il peptide è diviso in segmenti più piccoli, che sono sintetizzati separatamente usando SPPS.
Questi segmenti vengono quindi legati insieme usando metodi di legatura chimica. Questo approccio riduce il numero di fasi di accoppiamento richieste per la sintesi di peptidi di grandi dimensioni, che possono migliorare la resa e la purezza complessive del prodotto finale. Ad esempio, un peptide lungo può essere diviso in tre o quattro segmenti, ciascuno contenente 10-20 aminoacidi. Questi segmenti sono sintetizzati sulla resina, scissi e quindi legati in modo convergente.
Esempi delle nostre API peptidiche
Offriamo una vasta gamma di API peptidiche, ancheC20 - OTB - Glu (obbu) - ATBI10 - ATBU) foto - O oie - Oana - OE,C20 (OTBU) - Glu (OTBU), EPalmitoyl - Glu (OSU) - Otbu. Questi peptidi sono sintetizzati usando i metodi avanzati sopra descritti, garantendo un'elevata purezza e qualità.
Controllo della qualità nella sintesi API peptidica
Il controllo di qualità è della massima importanza nella sintesi delle API peptidiche. Abbiamo in atto un sistema di controllo di qualità completo per garantire che i nostri prodotti soddisfino i più alti standard.
Dopo la sintesi, il peptide viene analizzato da varie tecniche, tra cui HPLC, spettrometria di massa (MS) e risonanza magnetica nucleare (NMR). HPLC viene utilizzato per determinare la purezza del peptide, mentre la SM viene utilizzata per confermare il peso molecolare del peptide. NMR può fornire informazioni sulla struttura e la conformazione del peptide.
Conduciamo anche studi di stabilità per garantire che le API peptidiche rimangano stabili in diverse condizioni di stoccaggio. Ciò include testare il peptide a diverse temperature, valori di pH e in presenza di vari eccipienti.
Conclusione
La sintesi di API peptidiche è un processo complesso e multiplo che richiede tecniche avanzate e un rigoroso controllo di qualità. Come fornitore di API peptidiche, esploriamo costantemente nuovi metodi e tecnologie per migliorare l'efficienza e la qualità della nostra sintesi. Che si tratti di sintesi di peptidi solidi - fase, sintesi di fase della soluzione, legatura chimica o sintesi convergente, ci impegniamo a fornire ai nostri clienti prodotti peptidici di alta qualità.
Se sei interessato ad acquistare le nostre API peptidiche o hai domande sulla sintesi dei peptidi, non esitare a contattarci per le discussioni sugli appalti. Non vediamo l'ora di lavorare con te per soddisfare le tue esigenze API peptidiche.
Riferimenti
- Fields, GB, & Noble, RL (1990). Sintesi di peptidi solido - fase utilizzando aminoacidi 9 - fluorumetossicarbonil. International Journal of Peptide and Protein Research, 35 (2), 161 - 214.
- Dawson, PE, Muir, TW, Clark - Lewis, I., & Kent, SBH (1994). Sintesi di proteine mediante legatura chimica nativa. Science, 266 (5186), 776 - 779.
- Chan, WC e White, PD (2000). Sintesi del peptide di fase solida FMOC: un approccio pratico. Oxford University Press.