Ehilà! Come fornitore di TRAP-14, spesso mi viene chiesto come viene sintetizzato questo peptide. Quindi, ho pensato di prendermi il tempo per analizzare per te il processo di sintesi.
Comprendere la TRAP - 14
Prima di tutto, parliamo brevemente di cos'è TRAP - 14. TRAP sta per peptide attivante il recettore della trombina. TRAP - 14 è un peptide specifico con una catena di 14 aminoacidi. Svolge un ruolo cruciale nell'attivazione dei recettori della trombina, che sono importanti nel processo di coagulazione del sangue e in altre funzioni fisiologiche.
Il processo di sintesi
Passaggio 1: selezione degli amminoacidi
La sintesi di TRAP - 14 inizia con un'accurata selezione degli amminoacidi giusti. Dobbiamo scegliere amminoacidi di alta qualità che siano puri e privi di contaminanti. Ogni amminoacido ha le sue proprietà uniche e ottenere quelle giuste è la chiave per sintetizzare un peptide TRAP-14 funzionale. Ad esempio, dobbiamo assicurarci che i gruppi protettivi della catena laterale degli amminoacidi siano appropriati per il metodo di sintesi che utilizzeremo.
Passaggio 2: sintesi peptidica di fase solida (SPPS)
Nella maggior parte dei casi, utilizziamo la sintesi peptidica in fase solida per produrre TRAP - 14. Questo metodo è stato sviluppato da Robert Bruce Merrifield nel 1963 ed è stato un punto di svolta nella sintesi peptidica.
Il processo inizia fissando il primo amminoacido ad un supporto solido, solitamente una resina. La resina fornisce una base stabile per la catena peptidica in crescita. Una volta attaccato il primo amminoacido, possiamo iniziare ad aggiungere uno alla volta gli amminoacidi rimanenti.
Prima di aggiungere ogni nuovo amminoacido, dobbiamo attivarlo. Ciò comporta la sua reazione con un reagente di accoppiamento. Il reagente di accoppiamento aiuta a formare un legame peptidico tra il nuovo amminoacido e la catena peptidica in crescita sulla resina. Dopo la reazione di accoppiamento, è necessario lavare via eventuali reagenti e sottoprodotti non reagiti.
Uno degli aspetti positivi di SPPS è che è relativamente facile da automatizzare. Possiamo utilizzare sintetizzatori di peptidi per controllare l'aggiunta di amminoacidi, le fasi di attivazione e le fasi di lavaggio. Ciò non solo accelera il processo di sintesi ma riduce anche le possibilità di errore umano.
Passaggio 3: deprotezione
Dopo che tutti gli aminoacidi sono stati aggiunti per formare la catena di 14 aminoacidi di TRAP-14, dobbiamo rimuovere i gruppi protettivi. Questi gruppi protettivi sono stati aggiunti in precedenza per prevenire reazioni indesiderate durante il processo di sintesi.
La deprotezione viene solitamente eseguita utilizzando un acido forte, come l'acido trifluoroacetico (TFA). Il TFA può rompere i legami tra i gruppi protettivi e gli aminoacidi senza danneggiare la catena peptidica. Tuttavia, dobbiamo fare attenzione alle condizioni di reazione, come la concentrazione di TFA e il tempo di reazione, per evitare reazioni collaterali.
Passaggio 4: scissione dalla resina
Una volta completata la deprotezione, dobbiamo separare il peptide TRAP-14 dalla resina. Anche questa operazione viene effettuata utilizzando un reagente di scissione adatto. Dopo la scissione, il peptide viene rilasciato nella soluzione e la resina può essere rimossa mediante filtrazione.
Passaggio 5: purificazione
Il peptide TRAP-14 grezzo ottenuto dopo la scissione deve essere purificato. Esistono diversi metodi di purificazione che possiamo utilizzare, ma la cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC) è uno dei più comuni.
L'HPLC separa il peptide da eventuali impurità rimanenti in base alle loro diverse proprietà chimiche. Possiamo regolare la fase mobile e la fase stazionaria della colonna HPLC per ottenere la migliore separazione. Dopo la purificazione, possiamo ottenere un peptide TRAP-14 altamente puro.
Passaggio 6: caratterizzazione
Infine, dobbiamo caratterizzare il peptide TRAP-14 sintetizzato per assicurarci che abbia la struttura e le proprietà giuste. Usiamo tecniche come la spettrometria di massa per determinare il peso molecolare del peptide. Se il peso molecolare corrisponde al valore atteso, è una buona indicazione che la sintesi ha avuto successo. Possiamo anche utilizzare la spettroscopia di risonanza magnetica nucleare (NMR) per confermare la sequenza di aminoacidi e la struttura tridimensionale del peptide.
Confronto con altri peptidi
È interessante confrontare il processo di sintesi di TRAP-14 con altri peptidi. Per esempio,TRAPPOLA - 5è un altro peptide che attiva il recettore della trombina, ma ha solo 5 aminoacidi. La sintesi di TRAP-5 è generalmente più rapida e semplice perché ci sono meno amminoacidi da aggiungere. Tuttavia, i principi di base dell’SPPS continuano ad applicarsi.
Un altro peptide,DOTA - E - [c(RGDfK)2], ha una struttura più complessa. Contiene un peptide ciclico e un agente chelante (DOTA). La sintesi di questo peptide richiede passaggi aggiuntivi per formare la struttura ciclica e per attaccare il gruppo DOTA.
Secretina (ratto)è un ormone peptidico. Anche la sua sintesi segue i principi generali della sintesi peptidica, ma la sequenza e i requisiti di attività biologica possono portare ad alcune differenze nelle condizioni di sintesi e nei metodi di purificazione.
Perché scegliere la nostra TRAPPOLA - 14
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Riferimenti
- Merrifield, RB (1963). Sintesi peptidica in fase solida. I. La sintesi di un tetrapeptide. Giornale dell'American Chemical Society, 85(14), 2149 - 2154.
- Fields, GB e Noble, RL (1990). Sintesi peptidica in fase solida utilizzando 9 - fluorenilmetossicarbonil aminoacidi. Giornale internazionale di ricerca sui peptidi e sulle proteine, 35(2), 161 - 214.