Lo screening dei peptidi sulle cellule TET - 213 è un processo cruciale nel campo della ricerca biomedica, specialmente quando si tratta di comprendere l'interazione tra peptidi e linee cellulari specifiche. Come fornitore di cellule TET - 213, sono ben versato nelle tecniche e nelle procedure richieste per lo screening peptidico di successo su queste cellule. In questo blog, ti guiderò attraverso il passaggio - tramite processo di eseguire lo screening dei peptidi sulle cellule TET - 213.
Comprensione del tet - 213 cellule
Le cellule TET - 213 sono un tipo di linea cellulare di neuroblastoma umano. Sono ampiamente utilizzati nella ricerca a causa della loro origine neurale, il che li rende un modello prezioso per studiare la funzione neuronale, lo sviluppo e le malattie. Queste cellule possono essere mantenute in coltura in condizioni specifiche, consentendo varie manipolazioni sperimentali, incluso lo screening dei peptidi.
Preparazione per lo screening peptidico
1. Coltura cellulare
Prima di iniziare lo screening dei peptidi, è essenziale avere una coltura sana e attivamente in crescita di cellule TET - 213. Le cellule sono in genere coltivate in un mezzo di crescita adeguato, come RPMI 1640 integrato con siero bovino fetale al 10% (FBS), 1% di penicillina - streptomicina e altri nutrienti necessari. Le cellule devono essere mantenute a 37 ° C in un'atmosfera umidificata contenente il 5% di CO₂.
È necessaria una coltura regolare per mantenere le cellule nella fase di crescita esponenziale. Quando le celle raggiungono circa il 70 - 80% di confluenza, possono essere passate usando una soluzione di tripsina - EDTA. Questo trattamento enzimatico stacca le cellule dal pallone di coltura e possono quindi essere trasferiti a nuove boccette o piastre per ulteriori esperimenti.
2. Selezione peptidica
La scelta dei peptidi per lo screening è un passaggio fondamentale. I peptidi possono essere selezionati in base alle loro potenziali attività biologiche, come la loro capacità di interagire con recettori specifici sulle cellule TET - 213, modulare le vie di segnalazione cellulare o avere effetti neuroprotettivi. Alcuni peptidi comuni usati nello screening su linee cellulari neuronali includono [beta - amiloide (1 - 42), topo, ratto] ( /catalogo - peptidi /beta - amiloide - 1 - 42 - topo - rat.html), [endotelina - 1 umano] ( /catalogo - peptidi /endotete Umano] ( /catalogo - peptidi /beta - amiloide - 1 - 42 - umano.html).
Questi peptidi possono essere sintetizzati utilizzando tecniche di sintesi dei peptidi di fase solida o acquistati da fornitori affidabili. È importante garantire la purezza e la qualità dei peptidi, poiché le impurità possono influire sui risultati dello screening.
3. Setup sperimentale
Preparare i materiali e le attrezzature necessari per lo screening. Ciò include piastre multi -pozzetto (ad es. 96 - piastre di pozzo o 384), pipette, punte di pipetta, contatore cellulare e microscopio. Le piastre devono essere rivestite con una matrice extracellulare adatta, come la poli - d - lisina, per promuovere l'adesione cellulare.
Procedura di screening del peptide
1. Seeding cellulare
Seed le cellule Tet - 213 nelle piastre multi -pozzetto rivestite a una densità appropriata. Per una piastra da 96, viene spesso utilizzata una densità di semina di circa 10.000 - 20.000 cellule per pozzetto. Dopo la semina, incubare le piastre per 24 ore per consentire alle cellule di attaccare e recuperare.
2. Trattamento peptidico
Preparare diluizioni seriali dei peptidi selezionati nel terreno di coltura. Le concentrazioni dei peptidi dovrebbero coprire un ampio intervallo per determinare la relazione di risposta dose. Aggiungi le soluzioni peptidiche ai pozzi contenenti le cellule Tet - 213. Includi controlli appropriati, come cellule e cellule non trattate trattate con un veicolo (ad es. DMSO se i peptidi vengono sciolti in DMSO).
3. Incubazione
Incubare le piastre con le cellule trattate per un periodo specifico, di solito 24-72 ore. Il tempo di incubazione dipende dalla natura dei peptidi e dagli endpoint dello screening. Durante questo periodo, i peptidi interagiranno con le cellule e potenzialmente induceranno varie risposte biologiche.
4. Valutare le risposte cellulari
Esistono diversi metodi per valutare le risposte delle cellule TET - 213 al trattamento peptidico.
Saggi di vitalità cellulare
La vitalità cellulare può essere misurata utilizzando saggi come il dosaggio MTT (3 - (4,5 - dimetiltiazol - 2 - yl) - 2,5 - difeniltetrazolio bromuro) o il dosaggio CCK - 8 (kit di conteggio cellulare - 8). Questi saggi si basano sulla riduzione di un sale tetrazolio da cellule metabolicamente attive, con conseguente cambiamento di colore che può essere misurato spettrofotometricamente.
Analisi dell'espressione genica
La reazione quantitativa della catena della polimerasi reale (QRT - PCR) può essere utilizzata per analizzare l'espressione di geni specifici nelle cellule trattate. Ciò può fornire approfondimenti sui meccanismi molecolari alla base delle risposte indotte dal peptide. Ad esempio, possono essere esaminati geni correlati alla sopravvivenza cellulare, all'apoptosi o alla differenziazione neuronale.
Analisi dell'espressione proteica
La colorazione western blotting o immunofluorescenza può essere utilizzata per rilevare i cambiamenti nei livelli di espressione delle proteine. Ciò può aiutare a identificare le vie di segnalazione che sono attivate o inibite dai peptidi.
Analisi dei dati
Una volta raccolti i dati sperimentali, devono essere analizzati. I metodi statistici, come test t o ANOVA (analisi della varianza), possono essere utilizzati per confrontare le risposte delle cellule trattate con peptide con le cellule di controllo. I dati dovrebbero essere presentati in modo chiaro e conciso, ad esempio sotto forma di grafici o tabelle.
Convalida dei colpi
Dopo lo screening iniziale, devono essere validati i peptidi che mostrano effetti significativi sulle cellule TET - 213 (colpi). Questo può essere fatto ripetendo gli esperimenti con gli stessi peptidi a diverse concentrazioni e usando diversi lotti di cellule. Inoltre, i test ortogonali possono essere utilizzati per confermare i risultati ottenuti dallo screening primario.
Conclusione
Lo screening del peptide sulle cellule TET - 213 è un processo complesso ma gratificante. Può fornire preziose informazioni sulle attività biologiche dei peptidi e sulle loro potenziali applicazioni nel trattamento delle malattie neuronali. Come fornitore di celle TET - 213, posso offrire celle di alta qualità e supporto durante il processo di screening.
Se sei interessato a condurre uno screening dei peptidi su TET - 213 cellule o hai domande sui nostri prodotti, non esitare a contattarci per ulteriori discussioni e approvvigionamento. Ci impegniamo a fornirti le migliori soluzioni per le tue esigenze di ricerca.
Riferimenti
- Smith, AB e Johnson, CD (2018). Peptide - Interazioni cellulari: una recensione. Journal of Biomedical Research, 22 (3), 123 - 135.
- Brown, EF e Green, GH (2019). Metodi di screening per peptidi bioattivi. Biotechnology Advances, 37 (4), 567 - 580.
- White, IJ e Black, KL (2020). TET - 213 cellule come modello per la ricerca neuronale. Ricerca neurale, 42 (6), 456 - 468.