Nel regno della ricerca e dello sviluppo dei peptidi, la purezza dei peptidi del catalogo è della massima importanza. Come fornitore di peptidi di catalogo dedicato, comprendiamo il significato di fornire prodotti di alta qualità ai nostri clienti. A volte, nonostante i nostri migliori sforzi nei processi iniziali di sintesi e purificazione, potrebbe essere necessaria un'ulteriore purificazione dei peptidi del catalogo. In questo blog, esploreremo vari metodi e considerazioni per purificare ulteriormente i peptidi del catalogo quando richiesto.
Perché ulteriore purificazione?
Ci sono diversi motivi per cui potrebbe essere necessaria un'ulteriore purificazione dei peptidi del catalogo. In primo luogo, in applicazioni di ricerca altamente sensibili come saggi basati su cellule, studi in vivo o ricerca di biologia strutturale, persino tracce di impurità possono avere un impatto significativo sui risultati sperimentali. Le impurità potrebbero potenzialmente interferire con l'attività biologica del peptide, portando a falsi positivi o negativi.
In secondo luogo, i requisiti normativi in alcuni settori, come i prodotti farmaceutici, richiedono un livello molto elevato di purezza per i peptidi utilizzati nello sviluppo dei farmaci. Se un peptide viene considerato come un potenziale agente terapeutico, qualsiasi impurità potrebbe comportare rischi per la sicurezza dei pazienti e quindi sono essenziali ulteriori fasi di purificazione.
Metodi cromatografici
Inverted - Fase High - Performance Liquid Cromatography (RP - HPLC)
RP - HPLC è uno dei metodi più utilizzati per la purificazione dei peptidi. Separa peptidi in base alla loro idrofobicità. La fase stazionaria in RP - HPLC è un materiale idrofobico, in genere una colonna a base di silice con catene alchiliche attaccate (EG, C18 o C8). I peptidi con diverse idrofobicità interagiranno in modo diverso con la fase stazionaria, con conseguenti diversi tempi di ritenzione.
Per purificare ulteriormente i peptidi del catalogo usando RP - HPLC, dobbiamo prima selezionare una fase mobile appropriata. Una fase mobile comune è costituita da una miscela di acqua e un solvente organico come acetonitrile o metanolo, con l'aggiunta di una piccola quantità di acido (ad es. Acido trifluoroacetico, TFA) per migliorare la forma di picco. Regolando il gradiente del solvente organico, possiamo ottimizzare la separazione del peptide bersaglio dalle impurità.
Ad esempio, se abbiamo un peptide di catalogo comeLL-37, peptide antimicrobico, che è un peptide antimicrobico con potenziali applicazioni terapeutiche, RP - HPLC può essere utilizzato per rimuovere qualsiasi sintesi rimanente per - prodotti o frammenti degradati. La LL purificata - 37 può quindi essere utilizzata in saggi di attività antimicrobica più accurati.
Ione - Cromatografia di scambio
Ione - La cromatografia di scambio separa i peptidi in base alla loro carica. Esistono due tipi principali: cationi - cromatografia di scambio (CEX) e cromatografia di scambio anionico (AEX). Nel CEX, la fase stazionaria ha un gruppo caricato negativamente e i peptidi con una carica positiva netta si legaranno ad esso. In AEX, la fase stazionaria viene caricata positivamente e i peptidi caricati negativamente verranno mantenuti.
La scelta tra CEX e AEX dipende dal punto isoelettrico (PI) del peptide. Se il PI del peptide è inferiore al pH della fase mobile, il peptide avrà una carica negativa netta e può essere utilizzato AEX. Al contrario, se il PI è al di sopra del pH della fase mobile, CEX è più appropriato.
Ad esempio,Ureistachykinin II, un peptide con un profilo di carica specifico, può essere ulteriormente purificato usando la cromatografia di scambio ionico. Selezionando attentamente il pH della fase mobile e la forza ionica, possiamo ottenere una buona separazione del peptide target da altre impurità cariche.
Metodi elettroforetici
Sodio dodecil solfato - elettroforesi su gel di poliacrilammide (SDS - pagina)
Sebbene SDS - Page sia utilizzata principalmente per l'analisi delle proteine, può anche essere applicata alla purificazione dei peptidi in una certa misura. In SDS - PAGE, i peptidi sono denaturati da SDS e separati in base al loro peso molecolare. I peptidi migrano attraverso un gel di poliacrilammide sotto l'influenza di un campo elettrico.
Dopo l'elettroforesi, il gel può essere colorato per visualizzare i peptidi. La banda corrispondente al peptide target può quindi essere asportata dal gel e il peptide può essere eluita dalla matrice del gel. Tuttavia, questo metodo ha alcune limitazioni. Il processo di eluizione può essere complesso e potrebbe esserci una certa perdita di peptide durante la purificazione. Inoltre, SDS può essere difficile da rimuovere completamente dal peptide purificato.
Elettroforesi capillare (CE)
L'elettroforesi capillare è una potente tecnica di separazione per i peptidi. Offre un'elevata efficienza di separazione, breve tempo di analisi e basso consumo di campione. CE separa i peptidi in base alla loro carica - rapporto di massa. Esistono diverse modalità di CE, come l'elettroforesi della zona capillare (CZE), l'elettroforesi su gel capillare (CGE) e la cromatografia elettrocinetica micellare (MEKC).
CZE è la modalità più comunemente usata per l'analisi e la purificazione dei peptidi. In CZE, i peptidi sono separati in un capillare riempito con tampone sotto un campo elettrico. La separazione si basa sulle differenze nella mobilità elettroforetica dei peptidi. CE può essere accoppiato con vari metodi di rilevamento, come assorbimento UV, fluorescenza e spettrometria di massa, per migliorare l'accuratezza dell'identificazione e della purificazione dei peptidi.
Altre considerazioni
Solubilità
La solubilità del peptide è un fattore importante nel processo di purificazione. Se un peptide ha una scarsa solubilità nei solventi di purificazione, può portare a precipitazioni durante la purificazione, che influenzerà il recupero e la purezza del peptide. Per migliorare la solubilità dei peptidi, possiamo regolare il pH del solvente, aggiungere co -solventi o utilizzare agenti solubilizzanti specifici.
Analisi della purezza
Dopo un'ulteriore purificazione, è fondamentale analizzare la purezza del peptide. I metodi comuni per l'analisi della purezza includono cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC), spettrometria di massa (MS) e risonanza magnetica nucleare (NMR). L'HPLC può fornire informazioni sulla purezza cromatografica del peptide, mentre la SM può confermare il peso molecolare del peptide e rilevare eventuali impurità con masse diverse. NMR può essere utilizzato per determinare la struttura e la purezza del peptide a livello atomico.
Conclusione
Come fornitore di peptidi del catalogo, ci impegniamo a fornire peptidi di alta qualità ai nostri clienti. Quando è necessaria un'ulteriore purificazione dei peptidi del catalogo, abbiamo una varietà di metodi a nostra disposizione, inclusi metodi cromatografici, metodi elettroforetici e altre considerazioni come la solubilità e l'analisi della purezza. Selezionando attentamente il metodo di purificazione appropriato e ottimizzando le condizioni di purificazione, possiamo garantire che i peptidi soddisfino i requisiti ad alta purezza dei nostri clienti.
Se hai bisogno di peptidi di catalogo o hai bisogno di ulteriori servizi di purificazione, non esitare a contattarci per appalti e discussioni. Non vediamo l'ora di lavorare con te per soddisfare le tue esigenze di ricerca e sviluppo dei peptidi.
Riferimenti
- Snyder, LR, Kirkland, JJ e Dolan, JW (2010). Introduzione alla moderna cromatografia liquida. Wiley.
- Jorgenson, JW e Lukacs, KD (1981). Elettroforesi della zona capillare. Chimica analitica, 53 (8), 1298 - 1302.
- Laemmli, Regno Unito (1970). Scissione delle proteine strutturali durante l'assemblaggio della testa del batteriofago T4. Nature, 227 (5259), 680 - 685.