Gli ingredienti farmaceutici attivi di peptide (API) svolgono un ruolo cruciale nella medicina moderna, offrendo opzioni di trattamento mirate ed efficaci per una vasta gamma di malattie. Come principale fornitore di API di peptidi, comprendiamo l'importanza di produrre peptidi di alta qualità che soddisfano i più severi standard normativi. Uno dei passaggi chiave nella produzione di API peptidiche è la purificazione, che garantisce la rimozione di impurità e contaminanti per raggiungere il livello desiderato di purezza e qualità. In questo post sul blog, discuteremo dei passaggi coinvolti nella purificazione delle API peptidiche.
Passaggio 1: sintesi di peptidi grezzi
Il primo passo nella purificazione delle API del peptide è la sintesi del peptide grezzo. Questo viene in genere fatto usando la sintesi di peptidi in fase solida (SPPS), un metodo ampiamente usato per la sintesi chimica dei peptidi. In SPPS, il peptide viene costruito un aminoacido alla volta su un supporto solido, di solito una resina. Gli aminoacidi sono protetti con gruppi specifici per prevenire reazioni indesiderate durante il processo di sintesi. Una volta assemblata la catena del peptide, viene scissa dalla resina e deprotetta per ottenere il peptide grezzo.
Passaggio 2: filtrazione iniziale
Dopo la sintesi del peptide grezzo, la miscela di reazione contiene il peptide desiderato e varie impurità come aminoacidi non reagiti, reagenti di accoppiamento e frammenti di resina. La prima fase di purificazione è rimuovere queste particelle di grandi dimensioni e impurità insolubili attraverso la filtrazione. Un semplice processo di filtrazione che utilizza una carta da filtro o un filtro a membrana può rimuovere efficacemente le particelle visibili, lasciando una soluzione relativamente chiara contenente il peptide grezzo.
Passaggio 3: cromatografia preparativa
La cromatografia preparativa è un passo chiave nella purificazione delle API peptidiche. Viene utilizzato per separare il peptide desiderato dalle impurità rimanenti in base alle loro diverse proprietà fisiche e chimiche. Esistono diversi tipi di tecniche di cromatografia che possono essere utilizzate per la purificazione dei peptidi, tra cui la cromatografia in fase inversa (RPC), la cromatografia a scambio ionico (IEC) e la cromatografia a esclusione dimensionale (SEC).
- Cromatografia in fase inversa (RPC): RPC è la tecnica di cromatografia più comunemente usata per la purificazione dei peptidi. Si basa sulle interazioni idrofobiche tra il peptide e la fase stazionaria, che è in genere una resina idrofobica. La soluzione peptidica grezza viene caricata sulla colonna RPC e i peptidi vengono eluiti usando un gradiente di un solvente polare (come l'acqua) e un solvente non polare (come l'acetonitrile). I peptidi con diverse idrofobicità eluteranno in momenti diversi, consentendo la loro separazione. Ad esempio, un peptide comeSTEER-GLU-OEA-OEU-OSUPuò essere efficacemente purificato usando RPC.
- Cromatografia a scambio ionico (IEC): IEC separa i peptidi in base alla loro carica. La fase stazionaria in IEC è una resina con gruppi funzionali caricati, cationici o anionici. La soluzione peptidica grezza viene caricata sulla colonna IEC e i peptidi vengono eluiti usando un gradiente di un tampone con diversi punti di forza ionici o valori di pH. I peptidi con cariche diverse si legaranno alla resina con affinità diverse ed elui in momenti diversi.
- Cromatografia ad esclusione dimensionale (sec): SEC separa i peptidi in base alle loro dimensioni. La fase stazionaria nel SEC è una resina porosa e i peptidi sono separati in base alla loro capacità di entrare nei pori della resina. I peptidi più grandi elimineranno per primi, seguiti da peptidi più piccoli. Il SEC viene spesso usato come fase di lucidatura dopo RPC o IEC per rimuovere eventuali aggregati rimanenti o impurità a basso peso molecolare.
Passaggio 4: desalting
Dopo la cromatografia preparativa, le frazioni di peptidi purificate possono contenere sali e altre piccole molecole dai tamponi cromatografici. La desalting è il processo di rimozione di questi sali per ottenere una soluzione peptidica pura. Un metodo comune per la desalto è la dialisi, in cui la soluzione peptidica viene posizionata in una borsa di dialisi con una membrana semi-permeabile e dializzata contro un tampone con una bassa concentrazione di sale. Un altro metodo è la cromatografia di filtrazione in gel, che può separare il peptide dai sali in base alle loro differenze di dimensioni.
Passaggio 5: liofilizzazione
La liofilizzazione, nota anche come liofilizzazione, è il passaggio finale del processo di purificazione. Implica il congelamento della soluzione peptidica purificata e quindi la rimozione dell'acqua mediante sublimazione sotto vuoto. La liofilizzazione non solo rimuove l'acqua dalla soluzione peptidica, ma stabilizza anche il peptide prevenendo la degradazione e la crescita microbica. Il peptide liofilizzato risultante è una polvere secca che può essere facilmente immagazzinata e trasportata.
Passaggio 6: controllo di qualità
Il controllo di qualità è una parte essenziale del processo di purificazione dell'API del peptide. Dopo la purificazione e la liofilizzazione, il peptide viene analizzato utilizzando varie tecniche analitiche per garantirne la purezza, l'identità e la qualità. Alcune delle tecniche analitiche comuni utilizzate per il controllo di qualità dei peptidi includono cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC), spettrometria di massa (MS), risonanza magnetica nucleare (NMR) e analisi degli aminoacidi.
- Cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC): HPLC viene utilizzato per determinare la purezza del peptide separando il peptide da eventuali impurità rimanenti e quantificando le loro quantità. Un peptide ben purificato dovrebbe avere un singolo picco affilato sul cromatogramma HPLC, che indica un alto livello di purezza.
- Spettrometria di massa (MS): La SM viene utilizzata per confermare l'identità del peptide determinandone il peso molecolare. Il peso molecolare misurato del peptide dovrebbe corrispondere al peso molecolare teorico calcolato dalla sua sequenza di aminoacidi.
- Risonanza magnetica nucleare (NMR): NMR viene utilizzato per determinare la struttura e la conformazione del peptide. Può fornire informazioni sull'ambiente chimico dei residui di aminoacidi nel peptide e contribuire a confermarne l'identità.
- Analisi degli aminoacidi: L'analisi degli aminoacidi viene utilizzata per determinare la composizione di aminoacidi del peptide. La composizione di aminoacidi misurata dovrebbe corrispondere alla composizione prevista in base alla sequenza peptidica.
Passaggio 7: imballaggio e archiviazione
Una volta che l'API peptidica ha superato i test di controllo della qualità, è pronta per l'imballaggio e la conservazione. Il peptide è in genere confezionato in fiale sterili o ampoule sotto un'atmosfera di azoto o argon per prevenire l'ossidazione e la degradazione. I materiali di imballaggio dovrebbero essere scelti per essere compatibili con il peptide e per fornire una buona barriera contro umidità, ossigeno e luce. Le condizioni di stoccaggio per l'API peptidico dipendono dalla sua stabilità e dovrebbero essere attentamente controllate per garantire la sua qualità a lungo termine.
Come fornitore di API peptidiche, ci impegniamo a fornire ai nostri clienti API peptidiche di alta qualità che soddisfano i loro requisiti specifici. Le nostre strutture di purificazione all'avanguardia e il team di scienziati esperti assicurano che ogni lotto di API peptidico sia purificato secondo i più alti standard. Se sei interessato ad acquistare API peptidiche comePalmitoyl -glu (OSU) -otbuOFMOC-SER (TBU) -AIB-OH, Non esitate a contattarci per ulteriori informazioni e per discutere le tue esigenze specifiche. Non vediamo l'ora di lavorare con te per fornire le migliori soluzioni API peptidiche per la tua ricerca e sviluppo farmaceutico.
Riferimenti
- Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K. e Walter, P. (2002). Biologia molecolare della cellula. Scienze della ghirlanda.
- Jones, J. (1991). Sintesi di aminoacidi e peptidi. Oxford University Press.
- Snyder, LR, Kirkland, JJ e Glajch, JL (2010). Sviluppo pratico del metodo HPLC. John Wiley & Sons.