Ehi, compagni appassionati di celle! Come fornitore di cellule TET - 213, ho avuto la mia giusta dose di esperienze che si occupano di queste cellule uniche. In questo blog, condividerò alcuni suggerimenti su come mantenere la fattibilità delle cellule TET - 213.
Prima di tutto, capiamo cosa sono tet - 213 cellule. Sono un tipo di linea cellulare che ha mostrato un grande potenziale in varie aree di ricerca, come le neuroscienze e gli studi sul cancro. Ma mantenerli in vita e il calcio non è sempre una passeggiata nel parco.
Terreno di coltura cellulare
La base del mantenimento di qualsiasi linea cellulare è il giusto terreno di coltura. Per le celle TET - 213, un mezzo di alta qualità è un must. Di solito consiglio di usare un mezzo ricco di nutrienti essenziali. Il mezzo RPMI 1640, integrato con siero bovino fetale al 10% (FBS), penicillina e streptomicina, ha fatto miracoli per me. L'FBS fornisce i fattori di crescita e gli ormoni di cui queste cellule hanno bisogno per prosperare, mentre gli antibiotici aiutano a prevenire la contaminazione.
Assicurati di conservare il mezzo correttamente. Tienilo a 4 ° C e proteggilo dalla luce. Prima di usarlo, scaldalo fino a 37 ° C in un bagno d'acqua. Ciò imita la temperatura corporea ed è più comodo per le cellule.
Condizioni di incubazione
TET - 213 cellule sono piuttosto esigenti per il loro ambiente. A loro piace essere incubati a 37 ° C in un'atmosfera umidificata con CO₂ al 5%. Questo ambiente ricorda da vicino le condizioni fisiologiche nel corpo umano.
Investi in un buon incubatore. Dovrebbe avere una temperatura stabile e un controllo CO₂. Controllare regolarmente le impostazioni e la calibrazione dell'incubatrice per garantire che tutto sia in ordine. Inoltre, pulire regolarmente l'incubatore per evitare la costruzione di contaminanti.
Sottocultura
La sottocultura è un passo importante per mantenere la vitalità cellulare. Quando le celle TET - 213 raggiungono circa l'80-90% di confluenza, è tempo di dividerle. Innanzitutto, rimuovere il vecchio mezzo e lavare le cellule con soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) per sbarazzarsi di eventuali detriti. Quindi, aggiungi la soluzione di tripsina - EDTA per staccare le cellule dal pallone di coltura. Incubare il pallone a 37 ° C per alcuni minuti fino a quando le celle iniziano a arrotondare e staccarsi.
Una volta staccate le cellule, aggiungi un mezzo fresco per neutralizzare la tripsina. Centrifuga la sospensione cellulare a bassa velocità per pellet delle cellule. Resuspendere il pellet in mezzo fresco e trasferire le cellule a nuove boccette di coltura alla densità di semina appropriata. Una densità di semina di circa 5 x 10⁴ cellule/cm² di solito funziona bene per le cellule TET - 213.
Monitoraggio della salute delle cellule
Il monitoraggio regolarmente della salute delle cellule TET - 213 è cruciale. Usa un microscopio a contrasto di fase per controllare la morfologia cellulare. Tet sano - 213 cellule dovrebbero avere una forma uniforme ed essere ben attaccate al pallone. Se noti segni di morte cellulare, come cellule galleggianti o forme di cellule anormali, potrebbe essere un segno di un problema.
Puoi anche eseguire un test di fattibilità, come il test di esclusione blu di Trypan. Mescola una piccola quantità di sospensione cellulare con Trypan Blue. Le celle vivi escluderanno il colorante, mentre le celle morte lo prenderanno e appariranno blu. Conta il numero di cellule vive e morte usando un emocitometro per calcolare la percentuale di vitalità cellulare.
Qualità dei reagenti
L'uso di reagenti di alta qualità non è negoziabile. La qualità di FBS, antibiotici e altri additivi può avere un impatto significativo sulla vitalità cellulare. Quando si sceglie FBS, cercare un batch che è stato testato per la sua capacità di supportare la crescita cellulare. Evitare l'uso di reagenti o reagenti scaduti che sono stati conservati in modo improprio.
Alcuni altri fattori da considerare sono i peptidi che possono essere utilizzati insieme alle cellule TET - 213. Per esempio,Proteina di melanociti PMEL 17 (130 - 138) (umano)ha mostrato un potenziale in alcune ricerche relative alla segnalazione cellulare.Urechistachininin iEDynorphin A (1 - 17)sono anche peptidi che possono essere esplorati nel contesto della ricerca cellulare TET - 213.
Risoluzione dei problemi
Se hai problemi con il mantenimento della fattibilità delle cellule Tet - 213, non farti prendere dal panico. Ecco alcuni problemi e soluzioni comuni:
Contaminazione: Se vedi segni di contaminazione batterica o fungina, come la nuvolosità nelle colonie medi o visibili, scartare immediatamente le colture contaminate. Pulire accuratamente l'incubatore e tutte le attrezzature. Assicurati di seguire rigide tecniche asettiche quando si maneggia le cellule.
Scarsa crescita cellulare: Se le cellule non crescono bene, controlla il terreno di coltura. Potrebbe essere che il mezzo è vecchio o che gli integratori non funzionino correttamente. Inoltre, assicurarsi che le condizioni di incubazione siano corrette. A volte, un leggero variazione di temperatura o concentrazione di CO₂ può influire sulla crescita cellulare.
Distacco cellulare: Se le cellule si stanno staccando troppo facilmente, potrebbe essere dovuto a una tripsinizzazione eccessiva. Ridurre il tempo di incubazione della tripsina la prossima volta. Inoltre, assicurati che la soluzione Trypsin - EDTA sia fresca.
In conclusione, il mantenimento della vitalità delle cellule TET - 213 richiede attenzione ai dettagli e una buona comprensione delle loro esigenze. Seguendo questi suggerimenti, puoi mantenere il tuo tet - 213 cellule sane e produttive.
Se sei sul mercato per TET di alta qualità - 213 celle, mi piacerebbe fare una chiacchierata con te. Che tu sia un ricercatore che lavora su un piccolo progetto in scala o un'azienda biotecnologica su larga scala, posso fornirti le celle di cui hai bisogno. Contatta per iniziare una conversazione sulle tue esigenze e su come possiamo lavorare insieme.
Riferimenti
- Freshney, RI (2016). Cultura di cellule animali: un manuale di tecnica di base e applicazioni specializzate. Wiley.
- Doyle, A. e Griffiths, JB (2012). Cultura cellulare e tissutale: procedure di laboratorio. Wiley - Blackwell.