I problemi e le soluzioni comuni nel processo di sintesi dei peptidi includono i seguenti aspetti:
Contenuto di peptidi: il contenuto di peptidi si riferisce alla percentuale di sostanze peptidiche in un campione rispetto alle sostanze non peptidiche. Nei prodotti peptidici, oltre al peptide stesso, sono inclusi anche componenti non salini introdotti durante il processo di produzione, come acqua, solventi assorbiti, ioni di coordinazione e sali
Stabilità chimica:
Reazione di deammidazione: i residui Asn/Gln vengono facilmente idrolizzati per formare Asp/Glu.
Idrolisi: i legami peptidici nei peptidi vengono facilmente rotti mediante idrolisi, in particolare quelli formati dalla partecipazione di Asp, in particolare i legami peptidici Asp Pro e Asp Gly.
Reazione di racemizzazione: tutti i residui amminoacidici tranne Gly hanno atomi di carbonio alfa chirali e sono soggetti a reazione di racemizzazione sotto catalisi alcalina. I residui di Asp sono più inclini alle reazioni di racemizzazione.
- degradazione per eliminazione: Cys, Ser, Thr, Phe, Tyr e altri residui possono essere tutti degradati attraverso - eliminazione, che è più probabile che avvenga a pH alcalino ed è influenzata dalla temperatura e dagli ioni metallici
Stabilità fisica:
Denaturazione, adsorbimento, aggregazione o precipitazione: la denaturazione dei peptidi è solitamente correlata alla distruzione delle strutture terziarie e secondarie. Nello stato denaturato, i peptidi sono più soggetti a reazioni chimiche e la loro attività è difficile da ripristinare. L'intermedio formato durante il processo di denaturazione ha una bassa solubilità ed è soggetto ad aggregazione e precipitazione
conservazione:
Migliori condizioni di conservazione: i peptidi vengono generalmente conservati sotto forma di polvere liofilizzata, che è molto stabile a -20 gradi, soprattutto dopo la liofilizzazione e conservati in un essiccatore a -20 gradi. La maggior parte dei peptidi può essere conservata a questa temperatura per diversi anni senza modifiche. Per ridurre l'impatto dell'umidità, i peptidi liofilizzati devono essere riportati a temperatura ambiente in condizioni asciutte prima di essere esposti all'aria.
Imballaggio: Hesheng Biotechnology consiglia imballaggi di piccole dimensioni per evitare ripetuti cicli di congelamento-scongelamento, ridurre il numero di aperture e chiusure del contenitore, riducendo così le possibilità di manipolazione impropria o contaminazione batterica e garantendo la stabilità dei peptidi
Test di purezza:
Garanzia di purezza: tutti i peptidi consegnati hanno raggiunto la purezza richiesta e i peptidi che non soddisfano lo standard verranno scartati. I risultati del rilevamento HPLC e MS possono verificare la purezza e il peso molecolare del peptide, visualizzando le principali impurità.
Altri metodi di rilevamento, come l'analisi degli aminoacidi o l'analisi elementare, possono confermare la composizione degli aminoacidi dei peptidi come mezzo supplementare di conferma dei peptidi
Tecnologia di sintesi:
Sintesi peptidica in fase solida: la sintesi peptidica in fase solida non richiede la purificazione di prodotti intermedi, consentendo processi di sintesi continui e ponendo le basi per l'automazione della sintesi peptidica. Sulla base della sintesi chimica Fmoc, il peptide bersaglio è stato sintetizzato legando covalentemente il gruppo carbossilico dell'amminoacido C-terminale con una resina polimerica insolubile, e quindi partendo dal gruppo amminico dell'amminoacido
Il contenuto di cui sopra riassume i problemi comuni e le contromisure nella sintesi dei peptidi, coprendo molteplici aspetti come stabilità chimica, stabilità fisica, condizioni di conservazione, test di purezza, ecc.